超高效液相尺寸排阻色譜柱(UHPLC-SEC)是將尺寸排阻色譜的分離原理與超高效液相色譜系統(tǒng)相結(jié)合的新型分析工具。其核心在于采用了亞2微米(如2μm)或3μm的高性能球形硅膠填料,相較于傳統(tǒng)SEC柱(通常5-10μm),能顯著提升分離效率和分析通量。
該色譜柱嚴格遵循“分子篩效應(yīng)”進行分離:分子量大的組分無法進入填料孔隙,優(yōu)先洗脫;小分子則因深入孔道而滯留,從而實現(xiàn)基于流體動力學(xué)體積的精確分離。其突出優(yōu)勢在于高分辨率與高通量,以TSKgel UP-SW系列為例,2μm的粒徑使其能在UHPLC系統(tǒng)上實現(xiàn)單克隆抗體單體與二聚體的高效分離,分析時間較常規(guī)HPLC柱大幅縮短。同時,其表面通常鍵合了親水性二醇基或其他中性親水基團,能最大限度減少對生物樣品的非特異性吸附,保證蛋白、多肽等生物大分子的高回收率和良好峰形。
1、超高效分離能力
采用粒徑為2μm的硅膠顆粒作為填料,結(jié)合超高效液相色譜(UHPLC)系統(tǒng),可實現(xiàn)快速分離(如15cm規(guī)格柱)和高分辨率分析(如30cm規(guī)格柱)。其柱效顯著高于傳統(tǒng)HPLC色譜柱,能更精確地分離分子量差異較小的生物大分子(如小分子蛋白、多肽、寡核苷酸等)。
2、寬分離范圍與高排阻限
分子量排阻限達500kDa,分離范圍覆蓋5-100 kDa,適用于從小分子蛋白到中型分子的分析需求。例如,可高效分離分子量在5萬以下的多肽和小分子抗體(如Fab、scFv等)。
3、填料特性優(yōu)化
填料表面鍵合二醇基,具有低非特異性吸附特性,減少樣品損失,提高回收率。其孔隙容量和校正曲線斜率與TSKgel G2000SWxl相同,確保分析結(jié)果的可比性。
4、兼容性與靈活性
可兼容UHPLC和常規(guī)HPLC系統(tǒng),但為充分發(fā)揮性能,建議使用死體積?。ㄈ绻苈敷w積、檢測池體積?。┑姆治鱿到y(tǒng)。提供兩種規(guī)格(15cm和30cm),滿足快速篩查與高精度分析的雙重需求。
5、生物相容性與溫和分離條件
固定相為多孔硅膠,分離過程不依賴化學(xué)作用力,僅基于分子尺寸差異,避免對生物大分子結(jié)構(gòu)的破壞,適用于熱不穩(wěn)定或易降解樣品的分離。
6、高靈敏度與低檢測限
結(jié)合UHPLC系統(tǒng)的高流速和低擴散特性,可顯著提升檢測靈敏度,降低檢測限,適用于痕量生物大分子的定量分析。
7、長柱壽命與穩(wěn)定性
填料具有高化學(xué)穩(wěn)定性和機械強度,耐受寬pH范圍(2.5-7.5)和有機溶劑(如乙腈、甲醇),減少柱效衰減,延長使用壽命。
